Изучены ганглии 10-, 11,5- 13-, 15-, 20-, 23, 25-, 29-дневных зародышей, новорожденных, трехдневных и 10-дневных крольчат.
На данной ранней стадии эмбриогенеза зачатки интрамуральных ганглиев отсутствуют. Стенка на всем протяжении кишечной трубки представлена ложнодвурядным эпителием и подлежащей мезенхимой, отростчатые клетки которой, контактируя друг с другом, образуют рыхлую сеть. Нервные элементы здесь не выявляются, у зародыша данного возраста отсутствуют и все симпатические сплетения, включая симпатический ствол. Нервная трубка замкнута. По внутреннему краю ее располагаются митотически делящиеся клетки. Такое расположение митозов характерно для ложномногорядной структуры. В наружном крае вентральной части трубки импрегнируются серебром нейробласты, единственные отростки которых направляются в вентральные корешки (рис. I, 2). Нейробласты имеют типичную грушевидную форму. Большую часть их занимает крупное светлое ядро, цитоплазма образует конус, который продолжается в отросток. Имеются зачатки спинномозговых узлов с биполярными нейробластами, центральные отростки которых направляются в нервную трубку. Периферические отростки встречаются с волокнами переднего корешка, формируется смешанный нерв (рис. I). Нейробласты импрегнируются серебром, как удалось выяснить в процессе работы, более четко методом Дейнеки по сравнению с другими методами тотальной импрегнации зародышей.
Стенка пищеварительной трубки значительно толще (диаметр больше) по сравнению с предыдущей стадией, формирующийся желудок четко отличается от других отделов пищеварительного канала своими размерами и большей толщиной стенки. Кишечная трубка (рис. 3) имеет узкий просвет, выстланный цилиндрическим эпителием, в котором клетки плотно прилежат друг к другу. Ядра располагаются на разных уровнях, почему эпителий имеет вид многорядного (ложная многорядность). На поверхности эпителия обнаруживаются мелкие капли секрета. Рыхлая мезенхима подстилает эпителий. В ней содержатся капилляры и митотически делящиеся клетки. Снаружи кишка покрыта кубическим мезотелием, продолжающимся в брыжейку. Нейробласты в стенке кишки отсутствуют. У аорты с дорзолатеральной стороны видны группы нейробластов (рис. 4), образующие симпатический ствол. На импрегнированных серебром препаратах видно как от смешанных нервов к этим нейробластам подходят единичные нервные волокна, появление которых совпадает во времени с началом дифференцировки нейробластов. Последние импрегнируются серебром и тем самым четко отличаются от окружающих мезенхимных клеток. У 10-дневных зародышей не наблюдались нервные волокна, отходящие от смешанного нерва к аорте. По ходу корешков и продолжающих их спинномозговых (смешанных) нервов на рассматриваемой стадии развития имеются многочисленные удлиненные клетки с ядрами такой же формы (рис. 4). Эта форма ядер не характерна для нейробластов, но характерна для глиальных (шванновских) клеток (леммоцитов) – рис. 4, 5. Располагаются такие клетки значительно гуще в спинномозговых корешках, чем в спинномозговом нерве (рис. 4, 5, 6, 7). В дорсальном корешке они сконцентрированы в местах выхода волокон из ганглия в обоих (центральном и периферическом) направлениях. В вентральном корешке их концентрация выше возле нервной трубки. Таким образом, леммоциты группируются на ранних стадиях развития зародыша и его нервных структур в области выхода пучков нервных волокон. В смешанном нерве эти леммоциты располагаются в основном на периферии, на границе с окружающей мезенхимой. Выхода каких-либо клеток из нервной трубки обнаружить не удалось при самом тщательном просмотре многочисленных последовательных срезов, несмотря на то, что иногда клетки в нервной трубке и располагаются вплотную к наружной пограничной мембране (рис. 8). Эти факты свидетельствуют о том, что глиальные клетки по ходу корешков и спинномозгового нерва дифференцируются из предшественников, находящихся в мезенхиме, но не выселяются на данной стадий развития зародыша ни из вентральной, ни из дорсальной части нервной трубки. Клетки-предшественники могли выселиться из нервного зачатка (ганглиозной пластинки) на более ранней стадии эмбриогенеза и быть примешаны к мезенхиме. В корешках и спинномозговом нерве нейробласты не выявляются. Они не сопровождают и единичные нервные волокна, направляющиеся на данной стадии эмбриогенеза от смешанного нерва к симпатическому стволу. А между тем группы нейробластов возле аорты представляют собой зачатки симпатических стволов. На предыдущей стадии эмбриогенеза не было нервных волокон, идущих от спинномозгового нерва к аорте (г. communicans). Следовательно, нейробласты симпатического ствола не сместились по нервным пучкам. Способность клеток зачатка симпатического ствола импрегнироваться серебром совпадает с моментом направления к месту их концентрации возле аорты отдельных нервных волокон, исходящих из спинномозгового нерва. Очевидно, рассматриваемые нейробласты, подобно леммоцитам, развиваются из своих клеток - предшественников, находившихся в мезенхиме и мигрировавших в последнюю в более ранний период эмбриогенеза. О существовании миграции, происходящей до появления корешков и спинномозговых нервов косвенно свидетельствует и следующий факт. Центральные отростки клеток спинномозгового узла направляются от узла к нервной трубке. Следовательно, нейробласты этого ганглия или их предшественники (пронейробласты) не могли сместиться из нервной трубки по дорсальному корешку. Они должны были выселиться раньше образования самого корешка. Таким образом, нейробласты и пронейробласты симпатического ствола, как и пронейробласты спинномозговых узлов, не смещаются в узлы по нервным волокнам.
У 11,5-дневного зародыша кролика между аортой и первичной почкой находится цепочка небольших групп нейробластов, расположенных от зачатка симпатического ствола на дорсальной стороне аорты до вентрального края аорты (рис. 5 и 9). Weston (1963), Le Douarin a. Teillet (1974) указывают, что из этих цепочек формируется мозговое вещество надпочечника. Но некоторые нейробласты располагаются не столько возле аорты, сколько у самой почки и нельзя исключить в данном случае наличие элементов почечных (хотя и временной почки!) ганглиев.
В стенке 12-перстной кишки увеличилась общая масса тканей. Эпителии сохраняет ложномногорядное строение, мезенхима представлена широкопетлистой сетью, не обнаруживается еще уплотнение ее, т.е. дифференцировка производных мезенхимы не началась. Мезотелий все еще мало дифференцирован, так как состоит из кубических клеток. Нервные элементы в кишке по-прежнему не выявляются.
В отличие от предыдущих стадий эмбриогенеза к ганглиям симпатического ствола подходят сформированные уже r.communicantes в виде нервных волокон (рис. 10 и 11).
У 15-дневного зародыша в стенке 12-перстной кишки обнаруживаются отдельные нейробласты и нервные волокна. Одиночные или расположенные небольшими группами нейробласты находятся чаще в брыжеечном крае кишки (рис. 12). В противоположном крае кишечной стенки их меньше (рис. 13). Все нейробласты расположены снаружи от закладки первого (циркулярного) мышечного слоя. Они содержат крупное светлое ядро и короткий конической формы вырост цитоплазмы с нейрофибриллами, более грубыми (толще и интенсивнее импрегнируются), чем в дефинитивных нейронах.
При окраске по Нисслю
глыбки базофильного тигроидного) вещества в этих клетках не обнаруживаются,
что и характерно для нейробластов в отличие от нейронов (см. А.Г. Кнорре и Л.В.Суворова,
1959). Возле нейробластов встречаются отдельные мелкие ядра, которые, по всей
вероятности, принадлежат глиальным клеткам. В симпатическом ганглии 15-дневного
зародыша (рис. 103)
между более крупными клетками нейробластического ряда располагаются многочисленные
мелкие элементы, среди которых присутствует и клетки олигодендроглии. Нейробласты
и единичные нервные волокна, имеющиеся в кишечной стенке, представляют собой
зачаток мышечнокишечного (ауэрбахова) сплетения. Территории отдельных ганглиев
не ограничены капсулой (рис. 14,
15), о
чем свидетельствуют и препараты, окрашенные методом Бильшовского-Марещ для выявления
аргирофильных и коллагеновых волокон. Пучки нервных волокон, направляющиеся
в кишечную брыжейку и малочисленные еще волокна, входящие в кишку, не сопровождаются
нейробластами (рис. 16,
17). Поэтому
следует признать, что импрегнирующиеся серебром кишечные нейробласты не сместились
по нервным волокнам. Они дифференцировались из пронейробластов, которые вселились
в кишечную стенку раньше, но не импрегнировались серебром. Находящаяся под ложномногорядным
эпителием мезенхима характеризуется плотным расположением клеток. В кишечной
стенке имеется закладка циркулярного мышечного слоя, представленная короткими
клетками с типичными для них удлиненными ядрами. В эпителии, мезенхиме и на
уровне закладки мышечного слоя встречаются многочисленные митозы (рис. 14).
Наружная поверхность кишки покрыта слоем уже не кубических, а становящихся плоскими,
клеток мезотелия с овально удлиненными ядрами. В дифференцирующейся под мезотелием
соединительной ткани появились первые аргирофильные волокна, окрашивающиеся
методом Бильшовского-Мареш.
В боковом роге спинного мозга у зародышей данного возраста группируются клетки
вегетативного ядра.
В стенке 12-перстной
кишки выявляются нервные ганглии мышечнокишечного сплетения, окруженные очень
тонкой соединительнотканной капсулой из преколлагеновых волокон. В ганглиях
наряду с нейробластами встречаются единичные крупные клетки - дифференцирующиеся
мультиполярные нейроны (рис.18).
В цитоплазме их выявляются зерна базофильного (нисслевского) вещества. Рядом
с клетками нейробластического ряда располагаются мелкие ядра глиальных клеток.
В соединительной ткани между развивающимися нейронами имеются капилляры. На
территории ганглиев встречаются в состоянии митоза клетки относительно крупные,
что свидетельствует о принадлежности их к элементам скорее нейробластического,
чем глиального или фибробластического ряда. Импрегнирующиеся серебром клетки
в состоянии митоза не встречаются. Количество нейробластов во всех вегетативных
ганглиях увеличивается в процессе эмбриогенеза (сравни рис. 30,
33 и 34,
103, 104,
105).
Наряду с развитием нервных элементов в кишечной стенке продолжается дифференцировка
других тканей. Так, аргирофильные (преколлагеновые) волокна имеются уже не только
в соединительной ткани развивающейся серозной оболочки, но и во всех других
оболочках кишечной стенки (рис.
19). Кроме того, всюду рядом о аргирофильными находятся и очень
тонкие коллагеновые волокна, которые образуют густую сеть возле (кнутри) мышечной
оболочки. Циркулярный мышечный слой представлен уже удлинившимися клетками.
Появился наружный (продольный) мышечный слой (рис.
30). Эпителий сохраняет ложномногорядную структуру, граница его
с подлежащей соединительной тканью остается еще ровной. Появились бокаловидные
клетки. Дифференцируется каемка призматических клеток (рис. тот же, 20).
Четкая базальная мембрана представлена преколлагеновыми волокнами. Для развивающейся
под эпителием соединительной ткани характерно густое расположение клеток в отличие
от остальной части соединительнотканного слоя.
Эпителий серозной оболочки из предшествующего кубического стал плоским.
Зародыш 25-дневного возраста по уровню дифференцировки тканей кишечной стенки особенно резко отличается от предыдущих стадий. Изменился рельеф слизистой оболочки: появились ворсинки, покрытые однорядным призматическим каемчатым эпителием с бокаловидными клетками, имеются крипты, пока еще короткие, но с просветом внутри (рис. 21). В соединительной ткани всех слоев стенки наряду с преколлагеновыми находится большое количество коллагеновых волокон.
При этом для слизистой оболочки характерно наличие в большом количестве тех и других волокон, тогда как в подслизистом слое содержатся преимущественно коллагеновые волокна. Эластические волокна в соединительной ткани отсутствуют. Но в стенке артерий серозной оболочки видна внутренняя эластическая мембрана. В мышечной оболочке достаточно развит и продольный слой (рис. 21). Внутренний циркулярный слой стал значительно толще. Вокруг мышечных клеток обоих слоев располагаются выявляемые методом Бильшовского-Мареш преколлагеновые волокна, свидетельствующие о достаточно высоком уровне дифференцировки мышечных элементов. Мышечнокишечное (ауэрбахово) сплетение представлено сетью ганглиев (рис. 22), скопления клеток располагаются в местах перекреста нервных волокон. Большинство ганглиозных клеток представлено нейробластами. Их узкий ободок цитоплазмы вокруг ядра не импрегнируется серебром, поэтому в ганглиях на серебренных препаратах видны лишь клеточные ядра. Выявляемые серебром нейрофибриллы располагаются в конусовидной части цитоплазмы, которая не всегда попадает в срез. В ганглиях встречаются и отдельные мупьтиполярные нейроны, длинные отростки которых уходят в пучки волокон (рис. 23). Наличие в мышечнокишечном сплетении большого количества нервных волокон и преобладание в ганглиях нейробластов с короткими аксонами свидетельствует о том, что волокна в большинстве своем не являются отростками клеток интрамуральных ганглиев. Возле развивающихся нейронов находятся мелкие глиальные клетки. Митозы редки. Ганглии окружены соединительнотканной капсулой, состоящей из коллагеновых волокон. На данной стадии эмбриогенеза на срезах обнаруживаются и клетки (по 2-3 рядом) подслизистого (мейснерова) нервного сплетения, мышечная пластинка слизистой оболочки еще не выражена.
У новорожденного кролика уже во многих узлах встречаются крупные мультиполярные нейроны, хотя и немногочисленные (1-2 в нескольких узлах на тангенциальных срезах) - рис. 24. Некоторые нейроны имеют далеко уходящие от клетки отростки - клетки II типа по А.С.Догелю. У других, наряду о короткими, имеется и несколько длинных отростков, что отличает эти нейроны от известных клеток I типа по А.С.Догелю (нейроны I типа имеют один длинный отросток). Количество клеток нейробластического ряда увеличено по сравнению с пренатальными стадиями развития (с 15 до 30-25 на тангенциальных срезах). В узлах подслизистого сплетения насчитывается до десятка (вместо 2-3) клеток на отвесных срезах, но они в основном еще безотростчатые, малодифференцированные. Таким образом, к моменту рождения интрамуральные ганглии очень незрелые. Их характеризует малое количество дифференцированных нейронов с длинными отростками, которые могут вступать в синаптическую связь. Более незрелым является подслизистое сплетение.
Количество дифференцированных нейронов быстро возрастает после рождения, в отдельных узлах 3-дневного кролика встречается и до 5 мультиполярных крупных нейронов. Однако еще и в этом возрасте узлы мышечнокишечного сплетения остаются малодифференцированными, поскольку в них большинство клеток мелкие и со слабым развитием отростков.
В соединительной ткани к моменту рождения увеличивается количество преколлагеновых и коллагеновых волокон, которые образуют более густую сеть, чем у зародышей. Появляются тонкие эластические волокна в соединительной ткани всей стенки. В артериях четко выявляется внутренняя эластическая мембрана. Имеется закладка мышечного слоя слизистой оболочки, представленная отдельными клетками. Она не имеет формы слоя не только у новорожденного, но даже и у 3-дневного кролика, у которого идет процесс развития желез подслизистой оболочки (бруннеровых). Мышечная пластинка слизистой оболочки 12-перстной кишки (в отличие от пищевода) у взрослого кролика представлена плотным слоем клеток, от которого отходят отдельные тонкие пучки, расположенные между железами (рис. 25 и 26).
От рождения до 10-дневного возраста и далее до взрослого состояния продолжается дифференцировка всей кишечной стенки. Увеличивается общая масса тканей, формируются и удлиняются крипты, увеличивается объем мышечных элементов и слоев. Возрастает количество и толщина коллагеновых и эластических волокон в соединительной ткани. Эластические волокна у взрослого кролика обильны как в сосудах, так и в соединительной ткани разных участков кишечной стенки: в серозной оболочке, прослойках между пучками мышечных волокон, подслизистом слое и слизистой оболочке. В постэмбриональном периоде постепенно повышается и уровень дифференцировки нервных элементов. Возрастает количество мультиполярных нейронов в отдельном ганглии, клеточные тела их укрупняются, увеличивается количество и длина отростков. Нейрофибриллы становятся более тонкими и отчетливыми, зерна базофильного вещества более крупными и многочисленными. В интрамуральных как и в симпатических ганглиях зародышей встречаются клетки нейробластического ряда (крупнее других) в митотическом состоянии (чаще на более ранних стадиях эмбриогенеза).
Поскольку неимпрегнирующиеся серебром пронейробласты еще не идентифицированы, а импрегнирующиеся клетки не делятся, то вопрос о том, продолжается ли деление клеток нейроблаcтического ряда какой-то период после рождения, остается открытым.
У взрослого кролика в интрамуральных ганглиях находится большое количество крупных мультиполярных нейронов. Все они значительно больших размеров, чем у крольчат после рождения. Наряду с мультиполярными встречаются и безотростчатые слабо импрегнирующиеся серебром крупные клетка. Они характерны для интрамуральных ганглиев разных органов и не только кролика, но и других млекопитающих. Это не нейробласты, а дифференцированные нейроны, о чем свидетельствуют достаточно крупные размеры их и наличие базофильного вещества. Вероятно, это одна из форм нейронов вегетативных ганглиев, функциональное значение которых остается невыясненным. Что касается нейробластов, то в ганглиях взрослого организма их не удалось обнаружить, поскольку во всех клетках выявляется базофильное нисслевское вещество.
Нервные волокна располагаются по всей стенке кишки, окружают крипты. в подслизистом слое плотно располагаются многочисленные железы, толщина мышечной оболочки превышает таковую на предыдущих стадиях. В стенке кишки содержится большое количество эластических волокон, располагающихся сетью в подслизистой оболочке. Волокна пронизывают мышечные слои и в серозной оболочке снова образуют сеть. Эластические волокна развиваются в онтогенезе позже других элементов соединительной ткани.
Стенка пищевода 11-дневного зародыша кролика представлена многорядным эпителием и подлежащей узкопетлистой мезенхимой с капиллярами (рис. 27). Во внутреннем крае эпителия часто встречаются митотические фигуры. Верхушки клеток содержат секреторные капли. Мелкие капли находятся и на поверхности эпителия. Базальная мембрана почти не выявляется. Нервных элементов в стенке нет. Просвет узкий щелевидный.
У 13-дневного зародыша в эпителии определяются 3-4 ряда ядер, митотические фигуры встречаются исключительно в верхней части эпителиального пласта. Эпителий многорядный мерцательный, содержит бокаловидные клетки. Базальная мембрана выявляется в виде тонкой линии, волокон в соединительной ткани нет. В наружной части стенки пищевода импрегнируются серебром типичные нейробласты грушевидной формы и немногочисленные нервные волокна (рис. 28). Нервные элементы располагаются по всей окружности пищевода снаружи от закладки мышечного слоя, которая представлена сгущением клеток с овальными ядрами. Нервные волокна направляются к пищеводу из блуждающих нервов (рис. 29). Однако по их ходу как и в самих блуждающих нервах нейробластов нет. Следовательно, нейробласты не смещаются в пищевод по блуждающим нервам, они дифференцировались из попавших сюда пронейробластов, которые не выявляются импрегнацией серебром.
В 12-перстной кишке на данной стадии эмбриогенеза нейробластов еще нет, т.е. в пищеводе они выявляются раньше, чем в кишке, что свидетельствует о дифференцировке нейробластов в стенке кишечной трубки в кранио-каудальном направлении.
В стенке пищевода 15-дневного зародыша количество нейробластов значительно увеличилось по сравнению с предыдущей стадией развития (рис. 30 и 31). Расположены они снаружи от циркулярного мышечного слоя и представляют собой клетки мышечнокишечного сплетения.
В стенке 12-перстной кишки на этой стадии эмбриогенеза нейробластов значительно меньше, чем в пищеводе, и они не образуют скоплений - ганглиев. Следовательно, интрамуральные ганглии пищевода в своем развитии опережают ганглии 12-перстной кишки. Возле нейробластов располагаются и отдельные самые мелкие, очевидно, глиальные клетки.
В эпителии определяется 4-5 рядов ядер. Митотически делящиеся клетки располагаются в верхнем ряду. По сравнению с предыдущими стадиями развития ядра в эпителиальном пласте располагаются близко к просвету и значительно отступая от базальной мембраны. Последняя выявляется в виде тонкой нити. Под эпителием четко отграничены два слоя (рис. 28): широкий, состоящий из развивающейся соединительной ткани слизистой оболочки, и более узкий, состоящий из плотно расположенных циркулярно направленных клеток с овальными ядрами – это миобласты развивающегося циркулярного мышечного слоя (мышечная оболочка пищевода кролика на всем протяжении органа состоит из мышечной ткани скелетного типа). Некоторые элементы имеют вид коротких симпластов с несколькими ядрами. В них встречаются отдельные гладкие еще миофибриллы. Выявляется и представленная единичными элементами закладка продольных мышечных слоев. В наружной части стенки пищевода, в развивающейся адвентиции обнаруживаются аргирофильные (преколлагеновые) волокна, которые отсутствуют у 14-дневного зародыша (рис. 32).
В соединительной ткани, окружающей пищевод, наряду с преколлагеновыми содержатся и коллагеновые волокна.
К мало дифференцированным мышечным элементам направляются отдельные нервные волокна, которые позже образуют с ними контакты (17-18-дневные зародыши), заканчиваясь мелкой петелькой. Это зачатки нервных окончаний, которые могут быть и чувствительными (от клеток спинномозгового ганглия), и двигательными (от соматического ядра блуждающего нерва), Мышечные элементы представлены в это время миосимпластами и формирующимися мышечными трубочками, для малочисленных миофибрилл которых характерна точечная исчерченность. Фигуры митоза встречаются в миобластах и миосимпластах, как и в клетках нейробластического ряда (в ауэрбаховом сплетении).
У 17-18-дневных зародышей нервные волокна и нейробласты располагаются в основном снаружи от циркулярного мышечного слоя. Нервные волокна контактируют колечком или пуговкой с мышечными элементами как в наружной, так и в средней частях циркулярного мышечного слоя, в мышечной оболочке четко видна закладка не только циркулярного, но и продельных, наружного и внутреннего слоев, мышечные элементы представлены, как и у 15-дневного зародыша, миобластами и формирующимися миосимпластами. Последние характеризуются большей длиной, чем у 15-дневного зародыша. По периферии миосимпластов располагаются единичные миофибриллы с точечной исчерченностью. Эту стадию следует рассматривать как начало образования мышечных трубок.
К 20-дневному возрасту интрамуральные узлы увеличиваются в размерах (рис. 33, З4), в них увеличивается общее количество клеток. На поперечных срезах пищевода ганглии видны располагающимися один за другим снаружи от циркулярного мышечного слоя. В них находятся униполярные нейробласты, содержащие нейрофибриллы, но не имеющие глыбок базофильного вещества, аполярные (на срезе) и биполярные нейроны с мелкозернистым базофильным веществом (рис. 35), крупные мультиполярные нейроны и глиальные клетки. Встречаются редкие еще мультиполярные нейроны. Однако в пищеводе они встречаются чаще, чем в 12-перстной кишке. Мышечные элементы циркулярного слоя представлены длинными симпластами, немногочисленные фибриллы в которых занимают периферическое положение. Кроме того имеются зачатки и обоих продольных слоев мышечной оболочки (рис. 33). Мышечные волокна еще мелкого диаметра, поэтому их крупные ядра занимают на поперечном разрезе почти всю площадь волокна. Снаружи от мышечной оболочки располагается соединительная ткань будущей адвентиции и далее - соединительная ткань средостения, покрытая плоским мезотелием плевры, в соединительной ткани адвентиции и в базальной мембране выявляется аргирофильные (преколлагеновые) волокна (рис. 36). Такие же волокна находятся и в соединительной ткани между мышечными слоями (рис. 36). Вокруг интрамуральных ганглиев имеются сое-динительнотканные капсулы, состоящие из преколлагеновых волокон.
Коллагеновые волокна имеются в адвентиции, в соединительной ткани кнутри от мышечной оболочки и очень тонкие, едва отличимые в остальной части соединительной ткани по направлению к эпителию. Резкие изменения по сравнению с 15-дневным зародышем наблюдаются в эпителии. Он становится более многорядным, имеет до 8 рядов ядер вместо четырех, причем ядра находятся и в базальном ряду, во всех рядах они расположены густо (рис. 37). Все это свидетельствует о резком увеличении количества клеток по сравнению с предыдущей стадией развития. Появились поверхностные плоские клетки с овальными ядрами, что свидетельствует о происхождящей перестройке эпителия из многорядного в многослойный.
Все ткани 25-дневного зародыша значительно выше дифференцированны по сравнение с таковыми предыдущих стадий развития, в эпителии продолжается перестройка из многорядного в многослойный плоский (рис. 38, 39). С одной стороны, в нем сохраняются черты многорядного эпителия: большое число глубоких рядов ядер овальных, вертикально направленных, некоторые поверхностные клетки имеют круглые ядра, митотические фигуры встречаются преимущественно в верхних слоях, имеются бокаловидные клетки. С другой стороны, есть и признаки многослойного плоского эпителия: во многих поверхностных клетках овальные ядра ориентированы уже параллельно поверхности пласта. В состоянии митоза встречаются и ядра нижних рядов. В пищеводе кролика отсутствуют железы (Krause, 1921). Между эпителием и подлежащей соединительной тканью располагается довольно толстая базальная мембрана. Формируется слизистая оболочка, представленная узким слоем c густо расположенными клетками (рис. 38). Появляется закладка ее мышечного слоя (рис. 39), выявляются едва заметные редкие эластические волокна. Соединительная ткань широкого подслизистого слоя характеризуется редким расположением клеточных элементов, богата коллагеновыми волокнами, преколлагеновые волокна в ней редки, эластических волокон нет. Тонкие преколлагеновые волокна располагаются сразу под эпителием и обильны они в мышечной оболочке. Мышечная оболочка, представленная тремя слоями, состоит из дифференцирующихся волокон. В них видна продольная и четкая поперечная исчерченность, миофибрилл много, ядра крупные, располагаются в центре. Встречаются и волокна со смещенными на периферию ядрами. Однако последние настолько крупны, что занимают большую часть площади поперечного сечения волокна. Данное ядерно-плазменное отношение характерно для молодых волокон, диаметр которых в дальнейшем увеличивается. Нервные окончания на мышечных волокнах по-прежнему имеют примитивную форму и поэтому не представляется возможным отличить чувствительные окончания от двигательных. Они представлены колечком или пуговкой на конце осевого цилиндра длинного нервного волокна или короткой веточки волокна (рис. 40, 41). Возможно, что короткие ветви представляют собой зачатки двигательных окончаний, будущих моторных бляшек (у кролика мышечная ткань пищевода скелетного типа). Ядра леммоцитов в нервном окончании не обнаруживаются. Они появляются вскоре после рождения, и у 3-дневного кролика уже сформированы моторные бляшки. Однако они еще с единичными терминалями нервного волокна и малым количеством глиальных ядер (2-3 на срезах). В дальнейшем количество терминалей нервного волокна и ядер, расположенных на территории бляшки (подошве), постепенно увеличивается, так что у взрослого животного обычно насчитываются десятки ядер в одном окончании. Нет сомнения в том, что формирование бляшек происходит под влиянием развивающейся функции органа.
Интрамуральные ганглии располагаются между мышечными слоями. Здесь же находится и сеть нервных волокон, в местах перекреста которых располагаются скопления клеток (ганглии) разных размеров и формы. Среди клеток встречаются униполярные нейробласты с коротким отростком и униполярные нейроны с длинным отростком, уходящим в пучок нервных волокон. Редкие мультиполярные нейроны (рис. 42) разные; с двумя или несколькими далеко уходящими от клетки отростками (клетки II типа по А.С.Догелю), а также клетки со многими короткими и двумя-тремя далеко уходящими отростками, которые отличаются от описанных А.С.Догелем типов клеток, в узлах преобладают малодифференцированные клетки, нейробласты, узкая цитоплазма которых не импрегнируется серебром.
Выявляются единичные мелкие клетки подслизистого сплетения, расположенные как и в 12-перстной кишке зародыша данного возраста, возле сосудов.
У новорожденного кролика в интрамуральных ганглиях те же клеточные формы, но крупные дифференцированные нейроны встречаются чаще, что свидетельствует об увеличении их количества по сравнению с предыдущей стадией развития. Имеется подслизистое сплетение и мышечный слой слизистой оболочки. Перестроившийся эпителий становится многослойным плоским с несколькими слоями плоских клеток (рис. 45). Однако по уровню дифференцировки он еще далек от эпителия взрослого животного. В нем значительно меньше клеточных слоев и отсутствует процесс ороговения (сравни рис. 45 и 46). В соединительной ткани всех слоев стенки имеются тонкие эластические волокна. Они редки по сравнению с пищеводом взрослого кролика.
Для взрослого характерно обилие эластических волокон под эпителием и во всей соединительной ткани пищевода, включая адвентицию. Обильны у взрослого и коллагеновые волокна в слизистой оболочке и подслизистом слое. Они характеризуются и большей толщиной, чем у новорожденного кролика. Но в данных слоях соединительной ткани взрослого мало преколлагеновых волокон по сравнению с новорожденным кроликом. В адвентиции находятся в равном количестве как коллагеновые, так и преколлагеновые волокна. Преколлагеновые волокна преобладают в соединительной ткани мышечной оболочки, как у новорожденного, так и взрослого кролика.
Интрамуральные нейроны дифференцируются медленнее нейронов симпатического ствола и поэтому к моменту рождения интрамуральные узлы оказываются значительно менее дифференцированными, чем ганглии симпатического ствола (сравни рис.24, 105). В последнем большинство нейронов к моменту рождения представлено дифференцированными крупными мультиполярными клетками, которые окружены глиальными сателлитами и имеют длинные отростки. В интрамуральных узлах новорожденных кроликов, как у других млекопитающих и человека (что показывает обзор литературы), преобладают малодифференцированные нейробласты и растущие нейроны. Лишь некоторые клетки достигают больших размеров, имеют длинные отростки и поэтому способны контактировать с другими элементами. Рост нейронов вегетативных ганглиев происходит у кролика во второй половине эмбриогенеза, после 15-го дня. В интрамуральных узлах в это время появляются отдельные, более крупные по сравнению с остальными, клетками, содержащие четкие гранулы базофильного вещества. Это молодые дифференцирующиеся нейроны, которые у 20-дневного зародыша кролика чаще встречаются в узлах пищевода, чем 12-перстной кишки и еще отсутствуют в каудальном отделе толстого кишечника. Это свидетельствует о том, что дифференцировка интрамуральных нейронов происходит в краниокаудальном направлении (табл. 1).
Таблица № 1 показывает, что для дифференцировки эпителия совершенно не характерен кранио-каудальный градиент. Он не характерен и для дифференцировки соединительной ткани по развитию преколлагеновых и коллагеновых волокон. Однако поздно развивающиеся в онтогенезе эластические волокна появляются (едва заметны у 25-дневного зародыша) в пищеводе несколько раньше, чем в 12-перстной кишке. Зачаток мышечной оболочки появляется в пищеводе также несколько раньше, чем в 12-перстной кишке, однако дифференцировка мышечных волокон и слоев происходит параллельно в обоих органах, т.е. кранио-каудальный градиент не выражен, четко выражена разница в дифференцировке нейронов интрамуральных ганглиев в кранио-каудальном направлении. Что касается градиента органной дифференцировки ганглиев и стенки пищеварительной трубки (капсула ганглиев, рельеф слизистой оболочки и ее мышечная пластинка), то он выражен не по всем признакам. В частности, только по развитию мышечной пластинки слизистой оболочки, которая в пищеводе появляется раньше.
Следует отметить, что первые нейробласты, располагаются в стенке органов всегда снаружи от зачатка мышечной оболочки и появляются вместе с мышечным зачатком.
После рождения продолжается дифференцировка и рост незрелых элементов (нейробластов и растущих нейронов), поэтому в ганглиях увеличивается количество крупных нейронов. Однако и крупные нейроны не достигают размеров, характерных для клеток взрослого организма. Их рост продолжается после рождения (сравни рис. 42, 43 и 44). В ганглиях взрослых животных преобладают крупные нейроны, которые с разной интенсивностью импрегнируются серебром (рис. 43).
В симпатических узлах 20-дневных зародышей кролика часто встречаются растущие нейроны, в которых ядра окружены значительным слоем цитоплазмы (рис. 104). В таких нейронах иногда содержатся два ядра. Двуядерные нервные клетки часто встречаются в симпатических ганглиях на более поздних стадиях эмбриогенеза (29-дневный зародыш кролика) – рис. 105. В клетках вплотную или недалеко друг от друга расположены два интеркинетических ядра. Других фигур, которые указывали бы на возможный способ образования двуядерных клеток, встретить не удалось. У более молодых, 15-дневных, зародышей двуядерные клетки не обнаруживаются. В интрамуральных узлах зародышей кролика двуядерных нейронов встретить не удалось. Они редки и у взрослых животных. Наличие двуядерных нейронов в интрамуральных узлах млекопитающих отмечалось ранее (И.С.Ржаницына, 1954). Двуядерные клетки в симпатических стволах особенно характерны для кроликов (Ю.М.Жаботинский, 1953), они имеется и в симпатических стволах человека (Ю.М.Жаботинский).
Интрамуральные узлы как органы развиваются следующим образом. Первоначально это слабая группировка рассеянных нейробластов. Одиночные (12-перстная кишка) или расположенные группами (пищевод) они находятся снаружи от циркулярного мышечного слоя по всей окружности органа. Возле нейробластов располагаются мелкие ядра глиальных элементов (15-дневные зародыши кролика). Количество нейробластов увеличивается, они близко прилежат друг к другу, имеют типичную грушевидную форму и крупное эксцентрично расположенное ядро. Между нейробластами находятся крупные клетки в состоянии митоза (очевидно, клетки нейробластического ряда) и мелкие глиальные клетки. Нейробласты группируются, образуя отдельные территории – интрамуральные узлы, которые первоначально не имеют капсулы (15-дневные зародыши). Далее (20-дневные зародыши) появляется тонкая капсула, состоящая из малочисленных аргирофильных волокон. Между нейробластами и растущими нейронами дифференцируется соединительная ткань с капиллярами, капсулы (глиальные и соединительнотканные) вокруг отдельных нейронов формируются в ганглиях после рождения, поскольку они отсутствуют у зародышей всех возрастов.
При определении в настоящем исследовании степени дифференцированности (зрелости) тканей у животных различного возраста по появлению и состоянию структур, специфических для каждой ткани взрослого животного, оказалось возможным условно выделить пять основных этапов в развитии тканей стенки пищевода: первые три этапа характеризуются последовательным появлением различных специфических структур. IV этап - ткань новорожденного кролика, содержит все специфические структуры, но отличается от ткани взрослого количеством и величиной структур. V этап – ткань взрослого животного со всеми специфическими особенностями строения. Трудность сопоставления этапов развития столь разнокачественных структур, как нервные и разнообразные ненервные компоненты органа, в известной мере преодолевается тем, что учитываются общие для всех тканей узловые моменты их дифференцировки: переход от зачатковой (доспецифической) к тканевой дифференцировке клеток, уровень дифференцировки, достигаемый к моменту рождения, и уровень дефинитивной дифференцировки тканей у взрослого животного.
Эпителий
пищевода:
I – однослойный;
II – многорядный;
III – переход в многослойный;
IV – многоcлойный;
V - взрослого животного с большим количеством клеточных слоев, ороговевающий
(табл. 2).
Соединительная ткань:
I – появление преколлагеновых волокон;
II – появление коллагеновых волокон;
III – появление эластических волокон;
IV – ткань новорожденного кролика со всеми видами волокон;
V – увеличение количества и толщины волокон – соединительная ткань взрослого
животного.
Мышечная ткань:
I - стадия миобластов и первичных миосимпластов;
II - стадия формирования мышечных трубок - миосимпласты становятся более удлиненными,
миофибриллы единичные, но иногда имеют уже поперечную исчерченность;
III - стадия дифференцирующихся мышечных волокон с центрально расположенными
ядрами;
IV - стадия дифференцированных мышечных волокон;
V - увеличение количества и объема мышечных волокон - мионы взрослого животного.
Нервная ткань (нейроны):
I - появление нейробластов;
II – появление дифференцирующихся нейронов;
III - увеличение количества дифференцирующихся, появление дифференцированных
нейронов;
IV - увеличение количества и размеров дифференцированных нейронов;
V - большое количество крупных дифференцированных нейронов - нервная ткань взрослого
животного
Моторные бляшки:
I - установление контакта между нервными волокнами и мышечными элементами; примитивные
двигательные окончания представлены короткими боковыми веточками нервных волокон,
заканчивающимися колечком или пуговкой, шванновские ядра отсутствуют;
II - дифференцирующиеся моторные бляшки с единичными терминалями нервного волокна
и шванновскими ядрами;
III – IV - увеличение числа терминалей и шванновских ядер в бляшках, появление
в них подошвы, увеличение количества бляшек;
V - дифференцированные моторные бляшки взрослого животного.
Изложенные данные показывают, что нейробласты в стенке пищевода обнаруживаются в конце первой половины эмбрионального развития (13-14-дневный зародыш). Появление нейробластов совпадает по времени с началом специфической дифференцировки тканей (соединительная, мышечная ткани) или предшествует ей (эпителий). Специфическая дифференцировка тканей пищевода не начинается раньше, чем обнаруживаются нейробласты. В последней трети внутриутробного периода клетки интрамуральных ганглиев ауэрбахова сплетения по уровню дифференцировки вначале несколько опережают элементы других тканей, к моменту рождения отношения выравниваются. Так, у 20-дневного зародыша в ауэрбаховом сплетении имеются не только нейробласты, но и нейроны, клетки с несколькими отростками и зернами нисслевского вещества. Волокнистый компонент соединительной ткани на этой стадии по-прежнему представлен лишь преколлагеновыми волокнами. Мышечные элементы представлены мышечными трубками с небольшим числом лежащих на периферии фибрилл. Эпителий остается многорядным. Сопоставление тканей по уровню дифференцировки на данной стадии развития, казалось бы, позволяет признать большую степень дифференцированности за нервными элементами, однако нейроны в этом периоде развития зародыша находятся лишь на стадии "дифференцирующихся" (А.Г.Кнорре и Л.В.Суворова, 1959), так как отростки клеток короткие, чаще представлены намечающимися выпячиваниями цитоплазмы. Поэтому правильнее считать, что дифференцировка различных тканевых компонентов стенки пищевода идет синхронно. Нейроны в этом отношении не опережают мышечной и других тканей. Дифференцированные, но еще немногочисленные нейроны с отростками, уходящими в пучки нервных волокон (25-дневный зародыш), обнаруживаются в стенке пищевода в тот период, когда дифференцировка других тканей заходит также далеко вперед: эпителий претерпевает перестройку из ложномногорядного в многослойный, в соединительной ткани много коллагеновых, имеются преколлагеновые и начинают появляться эластические волокна, мышечная оболочка состоит преимущественно из дифференцирующихся волокон с центрально расположенными ядрами. В конце эмбрионального периода развития дифференцировка различных тканей идет синхронно, она продолжается и в постэмбриональном периоде.
Ткани новорожденного кролика имеют уже все основные специфические структуры, однако каждая из них по уровню развития еще резко отличается от соответствующей ткани взрослого животного. Ткани новорожденного кролика в отличие от взрослого характеризуются меньшим количеством дифференцированных структур и меньшими их размерами (нейроны, волокна мышечной и соединительной тканей, количество слоев в эпителии).
Сопоставление развития
нервных окончаний и иннервируемых ими мышечных волокон показывает, что нервные
волокна начинают контактировать с миосимпластами. Являются ли элементы контакта
чувствительными или двигательными окончаниями, на ранних стадиях развития определить
не представляется возможным. У 17-дневного зародыша имеются контакты нервных
волокон с мышечными трубочками. Мышечные элементы представлены уже не миобластами
и короткими симпластами, как это наблюдается у 15-дневного зародыша, а мышечными
трубочками. Трубочки находятся в самом начале своего развития, но превосходят
по длине миосимпласты 15-дневного зародыша, в них больше миофибрилл, последние
иногда имеют поперечную исчерченность. Позже мышечные трубки из бедных миофибриллами
становятся богатыми ими дифференцирующимися мышечными волокнами с центрально
расположенными ядрами, затем ядра в них смещаются на периферию. В таких дифференцированных
волокнах обнаруживаются уже не только примитивные двигательные окончания, но
и молодые моторные бляшки. Последние содержат единичные терминали нервных волокон
и незначительное число шванновских ядер (двухдневный кролик), чем существенно
отличаются еще от бляшек взрослого животного. Формируется нервно-мышечный прибор
в целом. Вначале устанавливается связь между обеими его частями, затем мышечные
элементы продолжают свою дифференцировку при сохранении примитивной формы двигательных
окончаний, и только в дифференцированных волокнах с периферическим расположением
ядер начинается дифференцировка дефинитивной формы бляшек, Последнее начинается
сразу после рождения, что, вероятно, связано с началом интенсивного функционирования
пищевода.
Дифференцировка всех компонентов стенки пищевода кролика продолжается в постэмбриональном
периоде.
Сопоставление тканей пищевода новорожденного кролика с таковыми взрослого животного показывает, что дифференцировка их в постэмбриональном периоде характеризуется преимущественно количественными изменениями имеющихся структур: увеличивается количество слоев в эпителии (рис. 45, 46), толщина волокон соединительной и мышечной тканей, количество дифференцированных нейронов в интрамуральных ганглиях, количество клеток в мейсснеровом сплетении, размеры нейронов. В ганглиях новорожденного кролика больше, чем у взрослого безотростчатых клеток, среди которых есть нейробласты.
Двигательные нервные окончания поперечнополосатой мускулатуры пищевода новорожденного кролика представлены еще малодифференцированными бляшками, в которых отсутствует скопление ядер. Окончание представлено короткой веточкой осевого цилиндра, расширенной на конце. У 3-дневных кроликов они состоят из единичных терминалей нервных волокон и нескольких шванновских ядер. Поэтому следует отметить, что бляшки дефинитивной формы образуются в постэмбриональном периоде развития.