Выявление названных ферментов показало различие в дифференцировке интрамуральных и симпатических узлов. В целях сопоставления обращалось внимание также на клетки спинномозговых узлов и спинного мозга (Л.В.Суворова, Г.Г. Есипенко, С.Н.Оленев и Л.Ф. Шкляева, 1974). Известно (см. обзор литературы), что все парасимпатические интрамуральные ганглии имеют не только холинергические, но также и клетки с положительной реакцией на моноаминоксидазу. В симпатических ганглиях преобладают адренергические нейроны, количество холинергических клеток различно в разных ганглиях (от 4,8 до 22% по Holmstedt a. Sjoqvist, 1959 ). Использованными методами выявления ферментов, участвующих в обмене медиаторов, ацетилхолинэстеразы - АХЭ (метод Карновского и Рутс, см. раздел материал и методика) и моноаминоксидазы (метод Гленнера) не удалось обнаружить интрамуральные нейробласты у зародышей кролика в первой половине эмбриогенеза. Однако в стенке пищевода в это время (13-дневный зародыш) нейробласты импрегнируются серебром. Следовательно, концентрация ферментов в них еще настолько мала, что не определяется указанными гистохимическими методами (рис. 47, 48). Ацетилхолинэстераза выявляется в клетках симпатических ганглиев и в волокнах блуждающих нервов (рис. 47), а также в клетках спинномозговых узлов и в развивающемся спинном мозге. В последнем реакция более интенсивная, чем в других структурах и характерна для определенных участков. А именно: для клеток передних рогов и дорсальных участков белого вещества, где реакция наиболее интенсивна. При выявлении моноаминоксидазы положительная реакция определяется в клетках симпатических узлов и особенно интенсивна она в передней (белой) спайке белого вещества спинного мозга (рис. 48). Слабо положительную реакцию проявляют клетки спинномозговых узлов. Блуждающие нервы остаются неокрашенными. Сравнение рис. 47 и 48 показывает отсутствие реакции в интрамуральных нейробластах пищевода при выявлении как ацетилхолинэстеразы, так и моноаминоксидазы. Ганглии симпатических стволов обнаруживают положительную реакцию в обоих случаях, причем реакции эти оказываются положительными и у более ранних (11-12 дней) зародышей. В это время впервые выявляются нейробласты симпатических узлов и при импрегнации серебром, т.е. с самого начала закладки симпатических ганглиев в их клетках обнаруживается ацетилхолинэстераза и моноаминоксидаза. Для симпатического ствола характерно наличие холинергических и адренергических (преобладают) клеток на всем протяжении эмбриогенеза. Содержание моноаминов постепенно увеличивается, так что к моменту рождения клетки с интенсивной окраской (синефиолетовая зернистость или такого же цвета однородный фон) мало отличаются от клеток взрослого животного.
Обработка нами одних и тех же срезов 14-дневных зародышей тем и другим методом показала положительную реакцию отдельных клеток при выявлении как ацетихолинэстеразы, так и моноаминоксидазы. В перикарионе таких клеток одновременно содержатся типичные коричневые гранулы при выявлении ацетилхолинэстеразы и фиолетовые гранулы при выявлении моноаминоксидазы. В интрамуральных ганглиях ацетилхолинэстераза и моноаминоксидаза выявляются на более поздних стадиях эмбриогенеза и неодновременно. Моноаминоксидаза выявляется поздно, только перед рождением.
Мышечнокишечное
(ауэрбахово) сплетение в стенке пищевода и двенадцатиперстной кишки четко определяется
у 16- и 18-дневных зародышей при выявлении ацетилхолинэстеразы (рис. 49,
51). На
поперечном срезе органов сплетение выглядит кольцом, состоящим из непрерывного
ряда нейробластов и развивающихся нейронов с зернистостью коричневого цвета
в цитоплазме. Однако не все клетки сплетения имеют положительную реакцию, некоторые
из них остаются неокрашенными. Холинергические и адренергические волокна в интрамуральных
сплетениях не обнаруживаются, хотя нервные волокна импрернируются серебром.
Очевидно, нервные волокна в эти сроки эмбриогенеза находятся еще на домедиаторном
(по В.Н. Швалеву и соавт., 1972) и досинаптическом этапе развития.
Клетки интрамуральных сплетений зародышей кролика данных возрастов совершенно
не видны при выявлении моноаминоксидазы (рис.
50). Клетки же симпатических стволов на тех же препаратах интенсивно
окрашены, в симпатических узлах 18-дневных зародышей обнаруживаются и многочисленные
адренергические волокна. Таким образом, большинство клеток интрамуральных сплетений
разных органов первоначально холинергические. Мышечнокишечное и подслизистое
сплетения пищевода зародыша человека 35 мм длиной (9-я неделя, по А.Г. Кнорре,
1967) также состоят из АХЭ- положительных клеток ( Smith a, Taylor, 1972). Группы
нейробластов снаружи от циркулярного мышечного слоя видны уже у зародыша 10
мм длиной (около 6 недель).
В спинном мозге не только в передних (как на предыдущей стадии эмбриогенеза), но и в боковых рогах четко выявляются группы холинергических клеток (рис. 52). Клетки с положительной реакцией на моноаминоксидазу отсутствуют, как и у взрослых кроликов. В белом веществе по-прежнему только зона передней спайки обнаруживает интенсивную (теперь уже более интенсивную) реакцию на моноаминоксидазу, т.е. содержит адренергические волокна (рис. 53). Вентральные и дорсальные корешки, как и спинномозговые нервы; состоят из холинергических волокон, которые окрашиваются более интенсивно, чем на предыдущей стадии развития зародышей. Спинномозговые ганглии состоят из холинергических клеток разной интенсивности окраски, т.е. обладающих разной концентрацией холинэстеразы. Для клеток спинномозговых узлов характерна и слабая положительная реакция при выявлении моноаминоксидазы. Обращает на себя внимание известный (см. обзор литературы) стойкий факт противоположной окрашенности структур при выявлений ацетилхолинэстеразы и моноаминоксидазы. Одни нервные стволы и участки спинного мозга, а также ганглии, проявляют положительную реакцию на ацетилхолинэстеразу и отрицательную на моноаминоксидазу, другие - наоборот (сравни рис. 52 и 53, 54 и 55).
В настоящее время известна закономерность (характерная не только для вегетативных ганглиев, но и для других отделов нервной системы) существования энзиматической противоположности участков нервной системы в отношении к локализации ацетилхолинэстеразы и моноаминоксидазы.
К моменту рождения (29-дневные зародыши) интрамуральные узлы остаются холинергическими. Перикарион их нейронов окрашивается в коричневый цвет при выявлении холинэстеразы и выглядит либо зернистым, либо комковатым, а иногда клетки окрашиваются однородно. У зародышей 16-18 дней перикарион имеет зернистый вид. Очевидно, структурные различия определяются состоянием клеток, связанным с уровнем их дифференцировки. В ганглиях, в отличие от предыдущих стадий эмбриогенеза, более заметна разница в постепенном изменении интенсивности окраски клеток; одни из них окрашиваются достаточно интенсивно, другие несколько слабее, а некоторые значительно слабее. Те же отношения между клетками наблюдаются и в ганглиях взрослого кролика, но у последнего максимальная интенсивность окраски клеток превосходит таковую 29-дневных зародышей. Перед рождением в интрамуральных ганглиях обнаруживается уже, хотя еще и слабая, положительная реакция некоторых клеток при выявлении моноаминоксидазы.
У взрослых животных (кролики, крысы) наряду с преобладающими холинергическими, многие клетки ауэрбахова сплетения как в 12-перстной кишке, так и в пищеводе интенсивно окрашиваются при выявлении моноаминоксидазы (рис. 56, 57). Таким образом, к моменту рождения мышечнокишечное сплетение по химической характеристике его клеток не достигает еще уровня развития, свойственного взрослым животным. Как в отношении выработки холинэстеразы, так и особенно выработки моноаминоксидазы дифференцировка клеток продолжается после рождения. Интрамуральные ганглии только в постэмбриональном периоде развития приобретают клетки с положительной реакцией на моноаминоксидазу, характерные для ганглиев взрослых животных.
В интрамуральных
узлах 29-дневных зародышей кролика обнаруживаются холинергические и адренергические
волокна, но в значительно меньшем количестве, чем у взрослого животного. Следовательно,
после рождения продолжается развитие и волокнистой основы сплетений.
Итак, в интрамуральных узлах в эмбриогенезе имеются клетки только с положительной
реакцией на холинэстеразу. Они преобладают и в ганглиях взрослых кроликов. Однако
у взрослых животных в интрамуральных сплетениях содержатся клетки (крупные и
мелкие) с интенсивной окраской при выявлении моноаминоксидазы. Значение этих
клеток пока не выяснено. В работах этого направления и данного вопроса, в частности,
мы находимся на начальных этапах знаний (см. обзор литературы). Возможно, указанные
клетки обнаруживают и положительную реакцию при выявлении холинэстеразы.
В симпатических ганглиях интенсивность окраски клеток при выявлений моноаминоксидазы
повышается в процессе эмбриогенеза. Как и у взрослых животных, в симпатических
узлах преобладают адренергические клетки.
У 29-дневных зародышей (перед рождением), как и у взрослых животных, в симпатических узлах преобладают адренергические волокна. По количеству волокон с положительной реакцией на ферменты симпатические узлы более дифференцированы, чем интрамуральные ганглии. Таким образом, гистохимические методы как и импрегнация серебром показывают меньшую зрелость к моменту рождения интрамуральных узлов по сравнению с симпатическими узлами.
Заслуживает внимания факт неодинаковой интенсивности окраски ганглиозных клеток как у 29-дневных зародышей, так и у взрослых животных. Одни клетки интенсивно окрашены, другие окрашиваются слабее, а некоторые клетки остаются неокрашенными. Это наблюдается как при выявлении указанных ферментов, так и при импрегнации серебром. Специального внимания требуют неокрашивающиеся клетки: являются ли они холинергическими, если не окрашиваются при выявлении моноаминоксидазы, или адренергическими, если не окрашиваются при выявлении ацетилхолинэстеразы, либо имеются клетки, не проявляющие положительной реакции при выявлении того и другого ферментов? Для разрешения этих вопросов необходимо использование метода одновременного выявления обоих ферментов, а также изучение серий срезов, в которых соседние срезы обработаны для выявления разных ферментов. Те же соображения относятся и ко всем окрашивающимся клеткам, что необходимо для более глубокого изучения ферментативной характеристики и классификации нейронов вегетативных ганглиев. Нельзя ответить на вопрос, сколько видов холинергических или адренергических клеток существует в ганглии: один или несколько. Являются ли клетки с высокой, умеренной и слабой интенсивностью окраски при выявлении фермента самостоятельными клеточными формами, работающий на "особом, специальном режиме" или это клетки одной категории, но находятся в разных преходящих функциональных состояниях? Тот же вопрос возникает и при изучении ганглиев на препаратах, импрегнированных серебром. Как известно, с разной интенсивностью серебро откладывается в клетках даже одного размерного класса, не только в клетках, разных по величине. Возможно, интенсивно импрегнирующийся ганглионарный нейрон в другой момент своей жизнедеятельности может быть окрашенным менее интенсивно. Видимо, это так. Важно также выяснение вопроса о возможности в нейронах одновременной, особенно высокой, холинэстеразной и моноаминоксидазной активности. Bennett (1969) признает существование клеток с отрицательной реакцией при выявлении обоих ферментов на том основании, что нехолинергических клеток много, а флуоресцирующих (аденергических) значительно меньше (2-й желудок птиц). Имеются сведения о том, что многие адренергические аксоны обладают низкой или умеренной реакцией на ацетилхолинэстеразу (Burnstock a. Robinson, 1967). Важным с биологической и медицинской точек зрения является вопрос о возможности изменения типа эргичности нейронов. Накопленные к 1979 году фактические данные по указанным вопросам приведены в обзоре литературы. Возможность одновременной выработки ацетилхолина и катехоламинов у нейронов имеется.
Это направление
в настоящее время быстро развивается, и мы находимся накануне обобщений, которые
изменят имеющиеся представления о функции вегетативной нервной системы и ее
нейронов, а также откроют возможности управления их функцией.