Основная часть работы выполнена на кроликах. Изучены серии срезов 10-, 11-, 11,5 -, 12-,13-, 15- 18-, 20-дневных зародышей и срезы органов 23-, 25-, 27- и 29-дневных зародышей (весь период пренатального развития 30 суток) новорожденные, 3-дневные, 100-дневные и взрослые животные, по 4-5 животных из каждого помета и три помета каждого возраста. Всего использовано более 200 животных, из них 24 половозрелых кролика.
Материал фиксировался в жидкости Буэна, либо специальным образом в случае импрегнации серебром или окраски по Нисслю. Кусочки органов (пищевод, желудок, 12-перстная кишка, толстая кишка) заливались в парафин или целлоидин. Срезы разной толщины (в зависимости от цели исследования) окрашивались разными общими и специальными методами гистологического исследования (окраска гематоксилином-эозином, гематоксилином Гейденгайна, по Маллори, резорцин-фуксином, по Нисслю, импрегнация серебром методами Мареш, Д.И.Дейнеки, Бильшовского-Грос). Зародыши ранних стадий импрегнировались серебром тотально. Причем, как удалось выяснить в процессе работы, нервные элементы более четко импрегнируются методом Гольджи-Дейнеки по сравнению с другими методами тотальной импрегнации зародышей. Для гистохимических исследований (выявление ферментов моноаминоксидазы и ацетилхолинэстеразы, связанных с обменом медиаторов передачи нервного импульса) готовились срезы (толщиной 12 мкм) в криостате из кусочков, замороженных в жидком азоте. Моноаминоксидаза выявлялась методом Гленнера и соавт. (1957), описанным в руководствах по гистохимической технике (Лилли, 1969). Инкубационный раствор готовился с использованием серотонина и неотетразолия. Продолжительность инкубации срезов 50 мин. Ацетилхолинэстераза определялась по предложенному в 1974 г, методу Карновского и Рутс (модифицированный метод Koelle, см. El-Badawi a. Schenk, 1967). Инкубационный раствор готовился с ацетилтиохолинйодидом, срезы инкубировались 1 ч. Раздельное изучение активности истинной и ложной холинэстеразы не было необходимым, поскольку в нейронах исследованных ганглиев ложная холинэстераза не обнаружена (Leaming a. Cauna, 1961; Cauna, Naik, Leaming a. Albert, 1961; Gunn, 1968, см. Л.В.Суворова и соавт., 1974). Использованы поперечные срезы туловища зародышей и ганглиев взрослых животных, отвесные и тангенциальные срезы стенки пищевода и двенадцатиперстной кишки. Теми же методами изучен эмбриональный материал крысы, куриных зародышей и зародышей человека. Использованы 10-, 12-, 13-, 14-, 15-, 16-, 19- и 21-суточные зародыши крысы (весь период эмбриогенеза 21 день), 5-, 6-, 7-, 8- и 12-суточные куриные зародыши (период эмбриогенеза 21 день); в отдельных случаях использован материал 17-суточных зародышей, а также новорожденных цыплят (по 2-3 зародыша каждого возраста).
Из клиники акушерства и гинекологии ЛПМЙ при искусственном прерывании беременности получены 7-, 8- (по 2 объекта), 11-12-недельный и 7-месячный зародыши человека. Последний имел вес 1300 г. и длину 43 см. Для определения моноаминоксидазы в нервных элементах перечисленных объектов использована инкубационная среда с солянокислым триптамином (Сборник статей под редакцией Б.Н.Вепринцева, 1976, стр, 100).
В работе использовано также несколько препаратов (с обще гистологической окраской) из коллекции сотрудницы нашей кафедры, асс, А.Г.Семеновой-Тян-Шанской, изготовленных из зародышей человека 3I-32-, 35-36-и 28-29-дневного возраста, любезно предоставленные автором в наше распоряжение (автор изучала развитие половых клеток).
В экспериментах с изучением значения тиреоидных гормонов для развития интрамуральных узлов крольчихам весом 2,7-2,8 кг скармливался тиреоидин в дозе 0,6 г в день. Через 14 дней животные теряли 350-400 г массы (12-14% веса), что характерно для легкой степени тиреотоксикоза (С.О.Тапбергенов, 1970). Наблюдались характерные для тиреотоксикоза повышение возбудимости животных и одышка (М.А.Ларина, 1963; В.И.Кандрор, 1965; К.М.Эстер, 1965; Л.М.Гольбер и В.Н.Кандрор, 1972, и др.). 13 – 19,5-дневные зародыши взяты от крольчих, кормленных тиреоидином с 5-го дня после покрытия (при скармливании тиреоидина с первых дней беременности часть крольчих остается бесплодной - С.И.Тереза, 1939). Зародыши старших возрастов и новорожденные кролики получены от матерей, кормленных тиреоидином с 14-го дня после спаривания. Зародыши каждой возрастной группы и новорожденные взяты из разных пометов (от 2 крольчих, в каждом случае по 4 зародыша из помета). Использованы методы импрегнации серебром по Д.И.Дейнеке (для 13 – 19-дневных эмбрионов) и Бильшовскому-Грос (27 – 29-дневных зародышей и новорожденных), окраска гематоксилином-эозином и по Нисслю. Подсчитывалось общее количество нервных клеток и количество крупных мультиполярных дифференцированных нейронов в ганглиях мышечно-кишечного сплетения разных отделов пищеварительной трубки. В каждом случае подсчитывалось количество клеток в 100 ганглиях. Полученные цифровые данные обработаны статистически.
При выполнении гистологической части комплексной работы, совместной с сотрудником нервной клиники Ленинградского Педиатрического медицинского института Т.А.Дрозниной, использованы биопсийные кусочки широчайшей мышцы спины детей, страдающих прогрессивной мышечной дистрофией. Материал взят у 18 больных в возрасте 7 – 15 лет. Гистологические срезы толщиной 6-8 мкм окрашивались гематоксилином-эозином, азуром-эозином, по Маллори, гематоксилином Гейденгайна и в некоторых случаях импрегнировались серебром по Бильшовскому-Грос.