12-суточный зародыш

На данной стадии имеются спинномозговые ганглии, корешки спинного мозга и соединительные ветви (rami communicantes), представленные пучками нервных волокон. По бокам от аорты, с дорсальной ее стороны, располагаются зачатки симпатических стволов, представленные небольшими скоплениями нейробластов. В передних корешках находятся многочисленные клетки, которые, как и у 11-суточных зародышей кролика, представлены, главным образом, глиальными элементами удлиненной формы. Импрегнирующиеся серебром нейробласты выявляются лишь возле аорты, в закладке симпатического ствола. Обращает на себя внимание факт количественного распределения клеток по нервным пучкам: сгущение их в передних корешках, более редкое расположение в спинномозговом нерве и еще более редкое - в соединительных ветвях. Объяснить это можно интенсивным размножением клеток в области переднего корешка (где видны многочисленные митозы) и смещением их по ходу растущих волокон. Выселение клеток из вентральной части нервной трубки в передний корешок не наблюдается, поэтому надо считать, что предшественники глиальньх клеток передних корешков находились к обсуждаемому сроку в мезенхиме возле нервной трубки и выселились из ганглиозной пластинки раньше. Эти данные полностью совпадают с тем, что наблюдается и в развитии кролика.

В пищеварительной трубке различаются разные отделы: пищевод, желудок, кишечник. Блуждающие нервы не содержат нейробластов. Лишь изредка встречаются отдельные из них. Нервных элементов в пищеводе, как и других отделах пищеварительной трубки, нет.

От каждого симпатического ствола между аортой и первичной (туловищной) почкой располагаются (как и у 11 - 12-суточных зародышей кролика) тяжи нервных волокон и нейробластов, которые мигрируют к закладке надпочечника.

Пищевод

Внутренняя поверхность покрыта многорядным эпителием, в котором преобладают ядра глубокого ряда. Многочисленные митозы располагаются в верхнем ряду. Мерцательные реснички и бокаловидные клетки еще не выявляются. Под эпителием располагается узкий мезенхимный слой, богатый клетками, но последние не располагаются вплотную друг к другу. Далее следует узкий слой плотно прилежащих друг к другу удлиненных клеток с узкими вытянутыми ядрами - зачаток мышечного слоя. Клетки в нем располагаются в 2-3 ряда. Следующий наружный слой представлен рыхлой мезенхимой. За ним в области пищевода располагаются стволы блуждающих нервов. Последние не содержат нейробластов.

12-перстная кишка и каудальный отдел (толстая кишка) кишечной трубки

Оба отдела имеют сходное строение стенки. Выстланы ложномногорядным эпителием, в котором преобладают ядра глубокого ряда. Это свидетельствует о неполном развитии многорядности, количество ядерных рядов увеличивается на более поздних стадиях эмбриогенеза. Митотические фигуры находятся в верхнем ряду. Над эпителиальными клетками обнаруживаются мелкие капли секрета, свидетельствующие о начавшемся секреторном периоде в развитии клеток. Под эпителием, как и в пищеводе, находится узкий мезенхимный слой, богатый клетками. Снаружи от него располагается зачаток мышечного слоя, представленного 1-2 рядами плотно лежащих удлиненных клеток (зачаток несколько тоньше, чем в пищеводе). Наружная оболочка представлена густопетлистой мезенхимой, покрытой кубическим мезотелием. В эпителии прямой кишки секреция выражена слабее, чем в других отделах кишечной трубки. Здесь же слабее выражен зачаток мышечной оболочки и разделение на слои кишечной стенки.

13-суточный зародыш

На данной стадии эмбриогенеза четко выражены различные отделы пищеварительной трубки: пищевод, желудок и отделы кишечника. Особенно выделяется желудок своим большим, по сравнению с другими отделами, диаметром и более толстой стенкой.

Пищевод

Выстлан многорядным мерцательным эпителием. Клетки плотно прилежат друг к другу, они высокие, узкие и с заостренными верхушками (рис. 60). Реснички мелкие и поэтому трудно различимы. Встречаются бокаловидные клетки. Митотические фигуры располагаются в разных рядах, однако преобладают в верхнем ряду ядер. Секреция эпителиальных клеток не обнаруживается. Под эпителием находится узкий слой плотнопетлистой мезенхимы, далее - уплотненный слой клеток на месте будущего циркулярного мышечного слоя и наружный слой рыхлой мезенхимы, в мезенхимной основе стенки появились малочисленные едва заметные зачатки преколлагеновых волокон. Вокруг пищевода импрегнируются отдельные нервные волокна. Зачаток мышечного слоя представлен узкими удлиненными клетками с вытянутыми палочковидными ядрами. Нейробласты не выявляются, их нет и в блуждающих нервах.

12-перстная кишка и каудальный отдел кишечной трубки планом строения стенки не отличаются от таковых на предыдущей стадии развития. Нейробласты в их стенке не выявляются. Зачаток мышечной оболочки четко виден во всех органах и представлен более толстым слоем более удлиненных элементов, чем на предыдущей стадии развития. Эпителий ложномногорядный, состоит из высоких узких клеток о заостренными верхушками. Наружная поверхность кишки покрыта кубическим мезотелием.

14-суточный зародыш

Пищевод

Стенка пищевода состоит из многорядного мерцательного эпителия с короткими ресничками (рис. 61), слоя густопетлистой мезенхимы, зачатка циркулярного слоя мышечной оболочки и наружного рыхлоклеточного слоя развивающейся адвентиции. В эпителии находятся бокаловидные клетки, митотические фигуры встречаются не только в поверхностном, апикальном, но и в базальном ряду ядер. Четко выражена базальная мембрана, которая стала более толстой по сравнению с предыдущей стадией развития. В наружном слое, циркулярном мышечном и подэпителиальном слоях стенки выявляются аргирофильные (преколлагеновые) волокна на препаратах, окрашенных методом Бильшовского-Мареш. Это свидетельствует о дифференцировке соединительной ткани из мезенхимного зачатка во всех оболочках пищевода. Зачаток циркулярного слоя мышечной оболочки представлен плотным расположением клеток с ядрами удлиненной формы, тогда как на предыдущей стадии эмбриогенеза он характеризовался в основном сгущением клеточных элементов. Тогда же не обнаруживались еще и нейробласты в стенке пищевода. У рассматриваемого зародыша снаружи от циркулярного мышечного слоя выявляются отдельные нейробласты и редкие нервные волокна (рис. 61). Они располагаются одиночно или рядом друг с другом (по 2-3) по окружности поперечного среза пищевода, так что образуется целый нейробластический пояс из малочисленных пока клеток. Глыбки базофильного (нисслевского) вещества в клетках на данной стадии развития не выявляются. Они отсутствуют и в нейробластах симпатического ствола. Однако на тех же препаратах (окрашенных галлоцианином) обнаруживается редкие гранулы в некоторых клетках спинномозгового ганглия и гранулы в узкой цитоплазме вокруг ядра в некоторых клетках передних рогов спинного мозга. Эти данные свидетельствуют о более поздней дифференцировке нейробластов вегетативных отделов нервной системы по сравнению с анимальными ее отделами.

Расположенные рядом с пищеводом стволы блуждающих нервов скоплений нейробластов не содержат. Однако отдельные нейробласты встречаются как в стволе блуждающего нерва, так и в вентральных корешках спинного мозга.

12-перстная кишка

Выстлана ложномногорядным эпителием с митотическими фигурами по апикальному краю пласта. Эпителиальные клетки снабжены тонкой каемкой. Под базальной мембраной (здесь она тоньше, чем в пищеводе) располагается узкий слой рыхлопетлистой мезенхимы, далее - полоска густого расположения клеток - зачаток циркулярного слоя мышечной оболочки и рыхлоклеточный слой серозной оболочки с плоским мезотелием. Снаружи от мышечного слоя располагаются отдельные (или по 2-3 рядом) мелкие нейробласты, в которых не выявляется базофильное вещество цитоплазмы. Нейробласты здесь более редки, чем в пищеводе и расположены в прилежащем к брыжейке участке кишечной стенки. В серозной оболочке, как и в остальных мезенхимных участках стенки появились аргирофильные (преколлагеновые) волокна, что указывает на начавшуюся дифференцировку соединительной ткани. Мезотелий состоит из кубических клеток.

Каудальный отдел толстой кишки и прямая кишка

В ложномногорядном эпителии кишечной стенки выявляется каемка, как и в эпителии 12-перстной кишки. Под тонкой базальной мембраной располагается густопетлистая мезенхима, далее - слой плотно расположенных мезенхимных клеток как первоначальный зачаток циркулярного мышечного слоя, однако дифференцировка гладкомышечных клеток здесь еще не началась, поэтому закладка мышечного слоя выглядит менее четкой, чем в вышележащих отделах пищеварительной трубки. Наружный слой мезенхимы покрыт кубическим мезотелием. Что касается начала дифференцировки соединительной ткани, то оно в каудальном отделе налицо и совпадает с тем, что наблюдается во всех других отделах кишечной трубки. А именно, преколлагеновые аргирофильные волокна выявляются как в наружном, так и в подэпителиальном мезенхимных слоях стенки. Нейробласты и нервные волокна не обнаруживаются. На тех же срезах хорошо выявляются мультиполярные нейробласты симпатических узлов и превертебральных сплетений, а также пучки нервных волокон, направляющиеся к разным органам пищеварительной трубки, в том числе и к прямой кишке. В нейробластах содержатся крупные светлые ядра, окруженные узким слоем цитоплазмы с несколькими отростками. В пучках нервных волокон (в нервных стволах) нейбробласты не обнаруживаются.

Приведенные данные показывают, что дифференцировка интрамуральных нейробластов из пронейробластов у крысы, как и у кролика, происходит в краниокаудальном направлении. Так в стенке пищевода 14-суточного зародыша мышечнокишечное сплетение представлено отдельными нервными волокнами и небольшими ганглиозными скоплениями нейробластов, следующими (на поперечных срезах) друг за другом. В 12-перстной кишке наряду с тонкими нервными волокнами имеются и ганглиозные группировки нейробластов, но они более мелкие и редкие, чем в пищеводе. В стенке каудальной кишки ни нервные волокна, ни нейробласты не выявляются. В меньшей степени названный градиент выражен в закладке гладкомышечного циркулярного слоя кишечной трубки. Зачаток циркулярного слоя имеется в обоих участках кишечника, 12-перстной и каудальной кишке. Однако в последней он менее дифференцирован и представлен здесь лишь сгущением мезенхимных клеток, тогда как в 12-перстной кишке в этом участке появились удлиненные клетки с овальным ядрами. Иначе говоря, в развитии мышечной ткани, как и соединительной, градиент выражен слабее. Хотя в стенке пищевода едва заметные зачатки преколлагеновых волокон появились у 12-суточного зародыша и отсутствовали в это время таковые в более каудальных отделах пищеварительной трубки, у 14-суточного зародыша во всех обследованных органах уровень дифференцировки соединительной ткани сохраняется одинаковым. В мезенхимных слоях стенки содержатся однотипные преколлагеновые волокна. Базальная мембрана выявляется импрегнацией серебром во всех обследованных отделах, однако в пищеводе она несколько толще, чем в других участках. Что касается эпителия, то для его дифференцировки, как и у кролика, краниокаудальный градиент не характерен. Эпителий всех отделов пищеварительной трубки более дифференцирован, чем у предыдущих зародышей. В обоих отделах кишечника он одинаково ложномногорядный. В призматических клетках появилась тонкая каемка. Бокаловидные клетки отсутствуют. В эпителии пищевода началась перестройка в многослойный плоский. Однако во всех органах он остается еще малодифференцированным.

15-суточный зародыш

Пищевод

Эпителий многорядный. Митотические фигуры встречаются в базальном и поверхностном рядах. Выявляется слабая секреция эпителия. У данного зародыша секреция резко выражена в эпителии желудка и слабо выражена в эпителии 12-перстной кишки. Под эпителием в пищеводе располагается широкий слой развивающейся соединительной ткани, в которой у эпителия клетки лежат гуще, чем в остальной части слоя. Снаружи от этого слоя находится циркулярный мышечный слой, далее - соединительная ткань адвентиции. На границе мышечного слоя и адвентиции вокруг пищевода располагается цепочка многочисленных нейробластов и нервных волокон. Появились отдельные клетки с более широкой цитоплазмой вокруг ядра - растущие нейроны.

12-перстная кишка

Стенку выстилает высокий ложномногорядный эпителий, в клетках которого имеется каемка. Под эпителием располагается широкий слой соединительной ткани с густым расположением клеток. Далее находится циркулярный мышечный слой, затем серозная оболочка с плоским мезотелием. В интрамуральных узлах, находящихся снаружи от мышечного слоя, появились отдельные растущие нейроны.

16-суточный зародыш

Пищевод

Все ткани органа по уровню дифференцировки представляют собой шаг вперед по сравнению с предыдущей стадией развития. Эпителий многослойный плоский. В апикальной части пласта насчитывается 2-8 слоя плоских клеток с овальными горизонтально направленными ядрами. Клетки в состоянии митоза располагаются в базальной части эпителиального пласта. Признаков секреции в эпителии не наблюдается. В соединительной ткани всех оболочек наряду с преколлагеновыми имеется уже и большое количество тонких коллагеновых волокон. Мышечная оболочка состоит из двух слоев волокон, мышечных трубочек с центрально расположенными ядрами. Интрамуральные ганглии между мышечными слоями увеличились в размерах по сравнению с предыдущей стадией эмбриогенеза. В ганглиях наряду с нейробластами располагаются и более крупные клетки - нейроны. Они значительно крупнее, чем растущие нейроны предыдущего зародыша. В нейронах выявляется базофильное вещество в виде густо расположенных гранул. Однако базофильные глыбки выявляются еще не во всех более крупных клетках, тем более они не выявляются в мелких нейробластах.

12-перстная кишка

Рельеф слизистой оболочки неровный, появились крупные ворскинки, имеется зачатки крипт. В однорядном эпителии призматические клетки снабжены всасывательной каемкой, появились редкие бокаловидные клетки, в которых ядра имеют еще овальную или округлую форму, что свидетельствует о небольшом количестве находящегося в них секрета. На поверхности кишки, где ворсинок еще нет, эпителий остается многорядным, в нем многочисленны митозы. Эпителий кишки, таким образом, как и в пищеводе, еще не достиг дефинитивного структурного уровня дифференцировки. В эпителии кишки видны следы секреции: мелкие капли на поверхности и в цитоплазме клеток. По сравнению с кроликом у крысы секреторная фаза в дифференцировке эпителия появляется поздно. Секреция в эпителии 12-перстной кишки наблюдается у 11-суточного зародыша. У крысы в кишечном эпителии секреция более обильна у 18-суточного, чем у 16-суточного зародыша, причем секреторной способностью обладает эпителий на всем протяжении кишечника, включая прямую кишку. В соединительной ткани всех слоев стенки, как и в пищеводе, наряду с ретикулиновыми волокнами имеется большое количество коллагеновых волокон. При этом ретикулиновые волокна располагаются преимущественно под эпителием и их мало в серозной оболочке. Мышечная оболочка, как и в пищеводе, состоит из двух, циркулярного и тонкого продольного, слоев. Мезотелий серозной оболочки представлен ллоскими клетками. Между мышечными слоями располагаются ганглии мышечнокишечного сплетения. Они уже крупные по сравнению с предыдущей стадией развития. В ганглиях кишки, как и пищевода, наряду с нейробластами часто встречаются крупные клетки - растущие нейроны с гранулами базофильного вещества в цитоплазме. Однако ганглии пищевода более многоклеточны, чем таковые в 12-перстной кишке.

Толстая кишка

В ганглиях мышечной оболочки толстой кишки (восходящая часть ободочной) содержатся в основном нейробласты с узкой цитоплазмой вокруг ядра. В них не выявляется базофильное вещество. Ганглии беднее клетками, чем в вышележащих отделах пищеварительной трубки. Растущие нейроны с неширокой зоной цитоплазмы есть и в каудальном отделе толстой кишки. Однако более крупные клетки, с большим количеством цитоплазмы, встречающиеся в 12-перстной кишке, в каудальном отделе кишечника отсутствуют. Что касается эпителия и соединительной ткани, то здесь они характеризуются теми же морфологическими признаками, как и ткани 12-перстной кишки. Призматические клетки снабжены каемкой, появились бокаловидные клетки. Во всех оболочках кишечной стенки имеются не только ретикулиновые, но и коллагеновые волокна. Однако те и другие волокна менее многочисленны по сравнению с 12-перстной кишкой. Для интрамуральных же ганглиев характерны не только количественные, но и качественные различия в дифференцировке клеток нейробластического ряда по длине пищеварительной трубки, то есть четко выражен краниокаудальный градиент.

Зародыш 21-х суток (к моменту рождения).

Пищевод

Эпителий многослойный плоский ороговевающий. Он содержит несколько слоев шиповатых клеток, слой зернистых клеток с гранулами кератогиалина и два слоя плоских клеток. Поверхностные из них имеют типичные для ороговевающих клеток уплотненные плоские ядра. От эпителия взрослого животного рассматриваемая ткань отличается слабо выраженным процессом ороговения, в мышечной оболочке нижней части пищевода возле перехода в желудок четко различаются два слоя гладкомышечных клеток: толстый внутренний циркулярный и наружный тонкий продольный. Мышечная ткань скелетного типа в средней части пищевода состоит из волокон, находящихся на разных стадиях дифференцировки: в одних волокнах ядра уже сместились на периферию, в других - они еще остаются в центре. Иначе говоря, к моменту рождения дифференцировка мышечных волокон не закончилась. У 19-суточного зародыша данная ткань еще менее дифференцирована и представлена исключительно волокнами с центрально расположенными ядрами.

Четко виден мышечный слой слизистой оболочки (развит за всем протяжении пищевода). В соединительной ткани слизистой и подслизистой оболочек преобладают коллагеновые волокна, преколлагеновые волокна редки. Последние находятся в основном в базальной мембране, мышечной оболочке и в адвентиции. Все волокна по сравнению с таковыми у взрослого животного очень тонкие, следовательно, толщина их постепенно увеличивается в постэмбриональном периоде онтогенеза. В интрамуральных ганглиях преобладают мелкие малодифференцированные клетки - нейробласты, не имеющие базофильных глыбок в цитоплазме. Отдельные крупные нейроны сопровождаются сателлитами, которые хотя еще и малочисленны, но формируют капсулу вокруг нейрона. Наряду с нейробластами находятся и растущие нейроны, которые содержат глыбки базофильного вещества. Количество цитоплазмы в таких клетках различно: либо это узкий ободок вокруг ядра, либо большее ее количество в более крупных клетках.

12-перстная кишка

Те же, что и в пищеводе, соотношения по уровню дифференцировки тканей наблюдаются и в кишечной стенке. В интрамуральных ганглиях преобладают нейробласты. Встречаются растущие нейроны, среди которых есть и крупные мультиполярные клетки с прилежащими, но редкими сателлитами (рис. 65). Призматический каемчатый эпителий с бокаловидными клетками и соединительная ткань, как и в пищеводе, являются дифференцированными тканями. Что касается органной дифференцировки, то она еще не завершилась: не развиты крипты, отсутствует слой мышечной оболочки.

Каудальный отдел кишечника

В ганглиях каудального отдела кишечника среди нейробластов также встречаются крупные мультиполярные дифференцированные нейроны и растущие нейроны с узкой зоной цитоплазмы вокруг ядра. Эпителий, соединительная и мышечная ткани (мышечная оболочка) являются зрелыми, дифференцированными, как и в 12-перстной кишке.

Результаты гистохимического исследования

Выявление ацетилхолинэстеразы (АХЭ) и моноаминоксидазы (МАО) показало те же закономерности, которые наблюдаются у кролика. Интрамуральные ганглии зародышей всех изученных возрастов (включая 19 суток эмбриогенеза, то есть перед рождением) содержат нейробласты и растущие нейроны с положительной реакцией при выявлении АХЭ (рис. 62, 63) и отрицательной реакцией при выявлении МАО (рис. 64). В интрамуральных узлах 12-перстной кишки и пищевода взрослой крысы наряду с преобладающими нейронами с положительной реакцией на АХЭ (риc. 66) находятся и клетки с положительной реакцией при выявлении МАО (рис. 67). В последнем случае встречаются как мелкие клетки, интенсивно окрашивающиеся, так и крупные клетки, окрашивающиеся с разной интенсивностью. Вероятно, мелкие клетки и является известными теперь sif-клетками интрамуральных узлов. В ганглиях обнаруживается большое количество нервных волокон с положительной реакцией на выявление моноаминоксидазы. Такие волокна малочисленны еще в узлах 19-суточного зародыша. Это указывает на развитие адренергических нервных волокон преимущественно в постэмбриональном периоде онтогенеза. Количество их увеличивается, очевидно, как за счет волокон, поступающих в ганглии из симпатических отделов нервной системы, так и за счет местных волокон, развивающихся вместе с клетками интрамуральных узлов. Более позднее выявление волокон по сравнению с клетками, имеющими положительную реакцию при определении ферментов, свидетельствует также о возможности существования домедиаторного периода в развитии нервных волокон. Разная интенсивность окраски клеток, наблюдающаяся у зародыша, а еще более резкая разница у взрослого животного, может объясняться не только уровнем дифференцировки клеток, но и особенностями их функционального состояния.

В спинном мозге наблюдаются участки с противоположной реакцией при выявлении ферментов: зоны с положительной реакцией на МАО не окрашиваются при выявлении АХЭ и наоборот. В то время как дорсальные участки белого вещества интенсивно окрашиваются при выявлении АХЭ и не окрашиваются при выявлении МАО, белое вещество передней спайки интенсивно окрашивается при выявлении МАО и не окрашивается при выявлении АХЭ. То же относится и к нейронам передних рогов. Это полностью совпадает с тем, что наблюдается у кролика (см. рис. 52 и 53).

Ганглии симпатических стволов интенсивно окрашиваются при выявлении моноаминоксидазы и значительно менее интенсивно - при выявлении ацетилхолинэстеразы, это объясняется преобладанием в симпатических узлах нейронов с положительной реакцией при выявлении МАО.

Таким образом, изучение дифференцировки интрамуральных нейронов и ненервных компонентов стенки пищеварительной трубки у крысы показало те же закономерности, которые отмечены в наблюдениях над кроликом. К моменту рождения ганглии остаются малодифференцированными, в них преобладают нейробласты.

Отличительной особенностью крысы по сравнению с кроликом является более позднее начало и более медленная дифференцировка интрамуральных нейробластов и нейронов.